Сборник работ Новосибирского научно-исследовательского санитарного института Вып. 11 - 1944

Активность фермента аскорбиназы нами определялась п» методу Букина (с некоторыми изменениями). Данный метод заключается в следующем: Исследуемый материал в количестве 100 г тщательно рас­ тирается в ступке для полного окисления аскорбиновой кис­ лоты у(проверка проводится по титрованию 1/1 ООО N раствора дихлорфенол-индофенола). Затем, отвешивается 10 г материа­ ла, еще раз тонко растирается в скупке и прибавляется ди­ стиллированная вода до 60—80 мл. Для определения актив­ ности фермента, в ряд небольших стаканчиков вносится воз­ растающее количество материала — от 1 до 5 мл., туда же прибавляется буфер PH 5,9 по> 4 мл., 0,5 мг .аскорбиновой кислоты и дестиллированной воды по 10 м. л. Точно через 15 минут действие фермента приостанавливают добавлением одного мл. 2-процентной соляной кислоты, и количеств» оставшейся неокисленной аскорбиновой кислоты титруется 1/1000 N раствором 2—6 д ихлорфенол-индоф енолом». В ре­ зультате определения находят то количество вытяжки, кото­ рое обеспечило за 15 мин. перевод 50% взятой аскорбиновой кислоты в обратимо-окисленную форму. Д ля упрощения опре­ деления важно при этом применение графической интерполя­ ции. Найдя искомый объем вытяжки, производим расчеты на 1 г материала и на 1 час работы фермента. Таким! образом, показания активности аскорбиназы представляют собой те к о ­ личества аскорбиновой кислоты в миллиграммах, которые пе­ реводятся в дегидроформу ферментом, заключенным в одном грамме ткани за 1 час работы. В целях сравнимости все опре­ деления ведутся при одинаковой температуре, в данном! слу­ чае мы вели опыты при 20°С. Все растворы приготовлялись на тщательно перегнанной воде, лишенной следов меди. Для контроля применяемых растворов на чистоту проводили холо­ стой опыт. В 2 стаканчика брались те же смеси, но без фер­ мента; содержимое одного из этих стаканчиков подвергалось немедленному титрованию, а второго —- через 15 минут. П о ­ лученные данные сведены в табл. 2. T uùa . 2 Активность аскорбиназы в миллиграммах дегидро -аскорбиновой . _________кислоты на 1 г свежей ткани з а 1 час работы Сорта капусты У ч а с т к и № 1 № 2 № 3 № 4 | № 5 № 6 .Слава“ . , 2,17 2,11 1,18 1,13 1,18 1,13. 72 1,79 1,94 1,15 1,04 1,19 1,1$