Сверхслабые излучения в межклеточных взаимодействиях, 1981

ни используют следующие клеточные культуры: первичные — фибробласты куриных эмбрионов, почки эмбрионов крупного рогатого скота — и перевиваемые культуры — СПЭВ, ВПК, СЭЛ, ; Hep- 1, Hela, А-1 и т. д. Цитопатический эффект под действием вируса развивается обычно медленно и характеризуется появлением групп округлых зернистых клеток, количество которых увеличивается по мере удлинения сроков инкубирования. Постепенно клетки сморщива- ются и отслаиваются от стекла. Вирус классической чумы птиц избран как обладающий ге- магглютинирующими свойствами, по которым его можно обна- ружить так же, как и по цитопатическим проявлениям в культуре фибробластов куриного эмбриона. Для культивирования вируса классической чумы птиц FPV использовали клетки фибробластов эмбриона кур 8—11-дневного возраста. Яйца мыли в проточной воде с мылом, затем скорлупу несколько раз обрабатывали спиртом, обжигали тупой конец яйца и обеззараживали йодом. Скорлупу над воздушным прост- ранством срезали ножницами. Извлекали зародыш, удаляли гла- за, клюв, лапки и крылья, а тело промывали раствором Хенкса. Суспензию клеток готовили путем механического измельчения зародыша с последующей трипсинизацией ткани. Готовили взвесь клеток фибробластов из расчета 300 ООО клеток на 1 мл среды и заливали по 5 мл в камеры. В качестве питательной среды исполь- зовали среду 199 с добавлением 10% сыворотки крупного рога- того скота. Однослойную культуру клеток фибробластов выращивали в термостате при 37°С в камерах в течение 48 ч. Вирус (предвари- тельно оттитрованный) вносили в культуру клеток в количестве 100 ЦТД. Использовался штамм вируса классической чумы птиц, полу- ченный из Института вирусологии АМН СССР им. Д. И. Иванов- ского. Инфекционную активность вируса поддерживали пасса- жами на куриных эмбрионах. Для заражения культуры ткани в камерах использовали 0,3 мл взвеси вируса с агглютинацион- ным титром 1 : 320 на 5 мл питательной среды. Эксперимент с вирусом классической чумы птиц проводили по той же схеме, что и с вирусом Коксаки А-13. Поскольку цито- натическое действие вируса классической чумы птиц проявлялось в полной мере к концу 2-х сут после заражения, время контак- тирования зараженной и «зеркальной» камеры ограничивали 2 сут. По истечении 2 сут камеры демонтировали, культуральную жидкость в зараженных и «зеркальных» камерах исследовали на наличие гемагглютининов и пассировали на куриных эмбрионах па предмет выявления вируса. Дно камер отпаивали, и растущая на нем культура подвергалась морфологическому исследованию. 39